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Calculadora da Lei de Beer–Lambert (A = εlc)
Em resumo: Calculadora da lei de Beer–Lambert: resolva A = εlc para absorbância, ε, caminho óptico ou concentração, converta %T em absorbância e encontre uma amostra desconhecida por uma curva de calibração. É gratuita, funciona no navegador e não precisa de download.
Digite três valores entre absorbância, absortividade molar, caminho óptico e concentração para encontrar o quarto. Escolha mol/L, mmol/L ou µmol/L e cm ou mm. Mude para o modo de calibração para colar seus padrões e obter a reta de melhor ajuste, o R² e a concentração desconhecida.
Preencha três valores e deixe em branco o que você quer encontrar.
Transmitância ↔ absorbância
Fórmulas da lei de Beer–Lambert
A = ε × l × c c = A / (ε l) ε = A / (l c) l = A / (ε c)
A = −log₁₀ T = log₁₀(I₀/I) A = 2 − log₁₀(%T) %T = 10^(2 − A)
A é a absorbância (adimensional). ε é a absortividade molar (também chamada coeficiente de extinção molar) em L mol⁻¹ cm⁻¹. l é o caminho óptico em cm. c é a concentração em mol/L. Uma cubeta padrão tem l = 1,00 cm.
| Absorbância A | 0 | 0.1 | 0.3 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 3.0 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| % transmitida | 100 | 79.4 | 50.1 | 31.6 | 10 | 1 | 0.1 |
Curva de calibração
Meça vários padrões de concentração conhecida e faça o gráfico de A contra c. Uma reta de mínimos quadrados A = m·c + b dá a inclinação m = εl. Calcule uma amostra desconhecida por c = (A − b)/m. Um R² próximo de 1 (acima de cerca de 0,995) indica uma boa reta. Só confie em resultados dentro da faixa dos seus padrões.
Exemplos resolvidos
Concentração de NADH
O NADH tem ε = 6220 L mol⁻¹ cm⁻¹ a 340 nm. Uma amostra em cubeta de 1,00 cm dá A = 0,311.
c = A/(εl) = 0,311 / (6220 × 1,00)
c = 5,00 × 10⁻⁵ M = 50,0 µM
Transmitância em absorbância
Uma solução transmite 25,0% da luz. Encontre A.
A = 2 − log₁₀(25,0) = 2 − 1,398
A = 0,602
Encontrar ε (estilo vestibular)
Uma solução de corante 2,50 × 10⁻⁵ M em cubeta de 1,00 cm tem A = 0,452.
ε = A/(lc) = 0,452 / (1,00 × 2,50 × 10⁻⁵)
ε = 1,81 × 10⁴ L mol⁻¹ cm⁻¹
Diluição mais Beer–Lambert (estilo vestibular)
Uma solução-estoque é diluída 10 vezes. A solução diluída dá A = 0,250 com ε = 5000 L mol⁻¹ cm⁻¹ e l = 1 cm.
c diluída = 0,250/5000 = 5,0 × 10⁻⁵ M. Multiplique pelo fator de diluição.
Estoque = 5,0 × 10⁻⁴ M
Amostra desconhecida por curva de calibração
Padrões de 0 a 50 µM dão A = 0,01231·c + 0,0013 (R² = 0,99998). A amostra desconhecida dá A = 0,300.
c = (0,300 − 0,0013) / 0,01231
c ≈ 24,3 µM (ε ≈ 1,23 × 10⁴ L mol⁻¹ cm⁻¹)
Dobrar o caminho óptico
A = 0,40 em uma cubeta de 1 cm. A mesma solução é colocada em uma cubeta de 2 cm.
A é proporcional a l, então A dobra.
A = 0,80 (%T cai de 39,8% para 15,8%)
Unidades e erros comuns
- Caminho óptico em cm. 10 mm = 1 cm. Uma cubeta de 5 mm tem 0,5 cm, não 5.
- Concentração em mol/L. Converta µM ou mM antes ou deixe a calculadora fazer isso. Se ε for dado por mg/mL (ou como A para 1 mg/mL), use a concentração em massa.
- Absorbância não tem unidade. Não escreva "A = 0,5 M". As unidades de ε cancelam as de l e c.
- Use log na base 10. A = −log₁₀T. Usar ln dá valores 2,303 vezes maiores.
- %T ou T. T é uma fração (0,25). %T é uma porcentagem (25). A = −log T = 2 − log %T.
- Fique na faixa linear. A maioria dos espectrofotômetros é confiável para A entre cerca de 0,1 e 1,0. Acima de cerca de 1,5, a luz espúria e efeitos químicos curvam a reta. Dilua a amostra.
- Faça o branco primeiro. Zere o instrumento com o solvente (e os reagentes) para que A venha apenas do analito.
- Meça em λmax. ε depende do comprimento de onda. Use o mesmo comprimento de onda para padrões e amostras.
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Abrir o editor MolDrawPerguntas frequentes
O que é a lei de Beer–Lambert?
Ela diz que a absorbância é proporcional à concentração e ao caminho óptico: A = εlc. Dobrando a concentração ou o caminho óptico, a absorbância dobra. Vale bem para soluções diluídas em um único comprimento de onda.
Quais são as unidades da absortividade molar ε?
L mol⁻¹ cm⁻¹ (também escrito M⁻¹ cm⁻¹). Essas unidades tornam A = εlc adimensional quando l está em cm e c em mol/L. Corantes que absorvem fortemente têm ε acima de 10⁴; transições d–d fracas podem ficar abaixo de 100.
Como converter transmitância em absorbância?
A = −log₁₀T, ou A = 2 − log₁₀(%T). Por exemplo, 50% T dá A = 0,301, 10% T dá A = 1 e 1% T dá A = 2.
Por que minha curva de calibração não é reta em absorbâncias altas?
Acima de cerca de A = 1 a 1,5, muito pouca luz chega ao detector, então a luz espúria e o ruído passam a pesar. Soluções concentradas também podem apresentar interações moleculares. Dilua as amostras até a faixa linear.
O que significa a inclinação de um gráfico de absorbância vs. concentração?
A inclinação é igual a εl. Com uma cubeta de 1 cm, a inclinação (em L/mol) é a absortividade molar ε. Se a concentração estiver em µM, divida a inclinação por 10⁻⁶ para obter ε em L mol⁻¹ cm⁻¹.
A reta de calibração deve passar pelo zero?
Idealmente sim, depois de zerar com o branco. Um pequeno intercepto é normal por causa de erros do branco e da cubeta. Esta calculadora ajusta o intercepto em vez de forçá-lo a zero e o usa ao calcular a amostra desconhecida.
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