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Calcolatore della legge di Lambert-Beer (A = εlc)
In breve: calcolatore della legge di Lambert-Beer: risolvi A = εlc per assorbanza, ε, cammino ottico o concentrazione, converti %T in assorbanza e trova un'incognita da una retta di taratura. È gratuito, funziona nel browser e non richiede download.
Inserisci tre valori tra assorbanza, assorbività molare, cammino ottico e concentrazione per trovare il quarto. Scegli mol/L, mmol/L o µmol/L e cm o mm. Passa alla modalità taratura per incollare i tuoi standard e ottenere la retta di regressione, R² e la concentrazione incognita.
Inserisci tre valori e lascia vuoto quello che vuoi trovare.
Trasmittanza ↔ assorbanza
Formule della legge di Lambert-Beer
A = ε × l × c c = A / (ε l) ε = A / (l c) l = A / (ε c)
A = −log₁₀ T = log₁₀(I₀/I) A = 2 − log₁₀(%T) %T = 10^(2 − A)
A è l'assorbanza (adimensionale). ε è l'assorbività molare (detta anche coefficiente di estinzione molare) in L mol⁻¹ cm⁻¹. l è il cammino ottico in cm. c è la concentrazione in mol/L. Una cuvetta standard ha l = 1,00 cm.
| Assorbanza A | 0 | 0.1 | 0.3 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 3.0 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| % trasmessa | 100 | 79.4 | 50.1 | 31.6 | 10 | 1 | 0.1 |
Retta di taratura
Misura diversi standard a concentrazione nota e riporta A in funzione di c. Una retta ai minimi quadrati A = m·c + b dà la pendenza m = εl. Ricava un'incognita da c = (A − b)/m. Un R² vicino a 1 (sopra circa 0,995) indica una buona retta. Fidati solo dei risultati che cadono nell'intervallo dei tuoi standard.
Esempi svolti
Concentrazione di NADH
NADH ha ε = 6220 L mol⁻¹ cm⁻¹ a 340 nm. Un campione in una cella da 1,00 cm dà A = 0,311.
c = A/(εl) = 0,311 / (6220 × 1,00)
c = 5,00 × 10⁻⁵ M = 50,0 µM
Da trasmittanza ad assorbanza
Una soluzione trasmette il 25,0% della luce. Trova A.
A = 2 − log₁₀(25,0) = 2 − 1,398
A = 0,602
Trova ε (stile AP)
Una soluzione di colorante 2,50 × 10⁻⁵ M in una cella da 1,00 cm ha A = 0,452.
ε = A/(lc) = 0,452 / (1,00 × 2,50 × 10⁻⁵)
ε = 1,81 × 10⁴ L mol⁻¹ cm⁻¹
Diluizione più Lambert-Beer (stile JEE)
Una soluzione madre viene diluita 10 volte. La soluzione diluita dà A = 0,250 con ε = 5000 L mol⁻¹ cm⁻¹ e l = 1 cm.
c diluita = 0,250/5000 = 5,0 × 10⁻⁵ M. Moltiplica per il fattore di diluizione.
Soluzione madre = 5,0 × 10⁻⁴ M
Incognita da una retta di taratura
Standard da 0 a 50 µM danno A = 0,01231·c + 0,0013 (R² = 0,99998). L'incognita dà A = 0,300.
c = (0,300 − 0,0013) / 0,01231
c ≈ 24,3 µM (ε ≈ 1,23 × 10⁴ L mol⁻¹ cm⁻¹)
Raddoppiare il cammino ottico
A = 0,40 in una cella da 1 cm. La stessa soluzione viene messa in una cella da 2 cm.
A è proporzionale a l, quindi A raddoppia.
A = 0,80 (%T scende da 39,8% a 15,8%)
Unità ed errori comuni
- Cammino ottico in cm. 10 mm = 1 cm. Una cella da 5 mm è 0,5 cm, non 5.
- Concentrazione in mol/L. Converti prima µM o mM, oppure lascia che lo faccia il calcolatore. Se ε è riferito a mg/mL (o come A per 1 mg/mL), usa invece la concentrazione in massa.
- L'assorbanza non ha unità. Non scrivere "A = 0,5 M". Le unità di ε annullano quelle di l e c.
- Usa il logaritmo in base 10. A = −log₁₀T. Usare ln dà valori 2,303 volte troppo grandi.
- %T o T. T è una frazione (0,25). %T è una percentuale (25). A = −log T = 2 − log %T.
- Resta nell'intervallo lineare. La maggior parte degli spettrofotometri è affidabile per A tra circa 0,1 e 1,0. Sopra circa 1,5, luce diffusa ed effetti chimici curvano la retta. Diluisci invece il campione.
- Prima il bianco. Azzera lo strumento con il solvente (e i reagenti) così che A derivi solo dall'analita.
- Misura a λmax. ε dipende dalla lunghezza d'onda. Usa la stessa lunghezza d'onda per standard e incognite.
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Apri l'editor MolDrawDomande frequenti
Che cos'è la legge di Lambert-Beer?
Dice che l'assorbanza è proporzionale alla concentrazione e al cammino ottico: A = εlc. Raddoppia la concentrazione o il cammino ottico e l'assorbanza raddoppia. Vale bene per soluzioni diluite a una sola lunghezza d'onda.
Quali sono le unità dell'assorbività molare ε?
L mol⁻¹ cm⁻¹ (scritto anche M⁻¹ cm⁻¹). Queste unità rendono A = εlc adimensionale quando l è in cm e c in mol/L. I coloranti fortemente assorbenti hanno ε sopra 10⁴; le deboli transizioni d–d possono stare sotto 100.
Come si converte la trasmittanza in assorbanza?
A = −log₁₀T, oppure A = 2 − log₁₀(%T). Per esempio 50% T dà A = 0,301, 10% T dà A = 1 e 1% T dà A = 2.
Perché la mia retta di taratura non è dritta ad alta assorbanza?
Sopra circa A = 1–1,5 pochissima luce raggiunge il rivelatore, quindi luce diffusa e rumore diventano importanti. Le soluzioni concentrate possono anche mostrare interazioni molecolari. Diluisci i campioni nell'intervallo lineare.
Che cosa significa la pendenza di un grafico assorbanza vs concentrazione?
La pendenza è uguale a εl. Con una cella da 1 cm la pendenza (in L/mol) è l'assorbività molare ε. Se la concentrazione è in µM, dividi la pendenza per 10⁻⁶ per ottenere ε in L mol⁻¹ cm⁻¹.
Una retta di taratura deve passare per lo zero?
Idealmente sì, dopo l'azzeramento con il bianco. Una piccola intercetta è normale a causa di errori del bianco e della cuvetta. Questo calcolatore stima l'intercetta invece di forzarla a zero e la usa quando calcola l'incognita.
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